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異戊烯基腺苷(IPA)是一類具有腺嘌呤環(huán)結(jié)構(gòu)的植物激素,它是一種結(jié)合態(tài)細胞分裂素,IPA結(jié)合在tRNA上,主要存在根尖,莖尖,芽尖,幼葉,種子或未成熟的果實中。能夠促進細胞的分裂和誘導芽的分化,促進葉綠體的發(fā)育,養(yǎng)分運輸,延緩植物的衰老等作用。異戊烯基腺苷的化學式為C15H21N5O4,分子量為335.358,可以溶于乙醇、乙醚和苯等有機溶劑。
檢測方法:液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS),高效液相色譜(HPLC),酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法等。
以液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)為例,它是通過HPLC將細胞分裂素分離出來,并進入串聯(lián)質(zhì)譜儀,測定離子的質(zhì)荷比(m/z)。根據(jù)質(zhì)譜峰面積和標準曲線,計算出樣品中的IPA的含量。主要用于含量微小的樣品,這里簡單的介紹一下流程。
1.樣品處理
將植物樣品在液氮下研磨后充分混勻取約0.3g(精確至0.0001g)樣品于15mL離心管中,加入5mL提取溶液異丙醇:水:甲酸(80:19:1,V/V),勻質(zhì)2min,放置4 度超聲提取1h,浸提液以10000r/min離心10min得上清液。然后再加入1ml二氯甲烷,低溫超聲提取30min,10000r/min離心10min得上清液,重復超聲提取一次,合并3次上清液。室溫氮氣減壓至水相,定容至1ml,振蕩混勻,用甲醇稀釋2倍后過0.22μm濾膜,待測。
2.色譜和質(zhì)譜條件
C18色譜柱 2.1*100mm 1.7μm,柱溫:35 °C,流速:0.3mL/min,流動相組成:A-0.1%甲酸水 B-乙腈 梯度洗脫,離子模式 ESI±模式。
3.標準曲線和含量計算
根據(jù)質(zhì)控實驗來確認目標峰保留位置,得到峰面積數(shù)據(jù),根據(jù)內(nèi)標、標準曲線及樣品稀釋倍數(shù),計算實際樣品中的含量。
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