葉酸是一種水溶性的維生素，是有喋啶、p-對氨基苯甲酸和1個(gè)或多個(gè)L-谷氨酸共軛組成的。分子式為C19H19N7O6，分子量為441.397，因?yàn)榫G葉中含量多，就名為葉酸。它也稱為維生素B9，或維生素M，這些都不重要。它是喋啶的衍生物，不溶于冷水卻溶于熱水，溶于乙酸，酚吡啶，氫氧化堿等，而不溶于乙醇，丁醇，丙酮等。在酸中不穩(wěn)定，易被光破壞。在動(dòng)植物中含有豐富，比如蛋，甜菜，菠菜，芹菜，堅(jiān)果，大豆等。

檢測葉酸的方法有多種，實(shí)驗(yàn)室常用的是高效液相色譜（HPLC）法。

對樣品要先進(jìn)行前處理，這個(gè)過程不同于提取，但也屬于提取。在提取的過程中，要便于后續(xù)的檢測，也就是為檢測服務(wù)的提取。舉例，稱取0.5g樣品，放在100ml的棕色瓶中。上面已經(jīng)提到了，葉酸對光是有敏感的，如果不注意很容易測不出來。加入70ml水，4ml碳酸氫鈉溶液，水浴超聲提取10min，調(diào)節(jié)ph值到8-9，搖勻，離心5min，取上清液測定。

HPLC測定，色譜條件是很重要的。比如，C18的色譜柱，常用的規(guī)格，柱溫35℃；流動(dòng)相為磷酸二氫鉀和氫氧化鉀溶液與甲醇的混合液，梯度洗脫，流速為0.8-1.0ml/min；紫外檢測器，波長為254nm或280nm；根據(jù)實(shí)際情況確定進(jìn)樣量，一般是10-20uL。

要測葉酸的含量，有采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法。就是先做一條曲線，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，梯度5-7個(gè)點(diǎn)，以測出來的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，組成一個(gè)線性的關(guān)系。我們現(xiàn)在還不知道樣品的濃度，只能測出來色譜峰面積。根據(jù)色譜峰面積，依據(jù)這條標(biāo)準(zhǔn)曲線，是可以計(jì)算出樣品中的葉酸含量的。在這個(gè)過程中，色譜條件是不變的，確定它的穩(wěn)定性，重復(fù)性，回收率。為了計(jì)算的準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2需要大于0.999。