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腺苷一磷酸,簡(jiǎn)稱AMP,它是腺嘌呤核苷酸,是一種有機(jī)化合物。它的化學(xué)式為C10H14N5O7P,分子量為347.22,微溶于乙醇和沸水,不溶于乙醚。它是由一個(gè)腺嘌呤,一個(gè)核糖和一個(gè)磷酸基團(tuán)組成。它可以用作食品生產(chǎn),藥物研發(fā),生化試劑。在細(xì)胞體內(nèi),AMP參與能量的存儲(chǔ)和釋放,當(dāng)細(xì)胞需要能量的時(shí)候,AMP就吸收能量,變成ADP和ATP;當(dāng)細(xì)胞用完了能量的時(shí)候,就會(huì)逐漸變成AMP了。除此之外,它還參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝。
檢測(cè)方法有高效液相色譜(HPLC)法,分光光度法等。這里以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程。
1.樣品處理
細(xì)胞或組織樣本的樣本,采用破碎、勻漿、離心,過(guò)濾等方法,以釋放AMP。
2.色譜條件
C18色譜柱,常用的規(guī)格,長(zhǎng)度250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um,柱溫25℃;流動(dòng)相一般是由磷酸鹽和甲醇或乙腈組成,根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整比例,梯度洗脫,流速一般為1ml/min。紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)254nm,進(jìn)樣量10uL,僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用AMP的標(biāo)準(zhǔn)品,制備一系列的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液,成倍的,梯度的稀釋5-7個(gè)點(diǎn),在檢測(cè)器的有效范圍內(nèi)。根據(jù)上述的色譜條件,上機(jī)測(cè)定色譜峰。對(duì)峰面積進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分,以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo),描點(diǎn)連線,繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程?;貧w方程的相關(guān)系數(shù)r2>0.999,考慮回收率,重復(fù)性。
4.樣品測(cè)定和結(jié)果計(jì)算
將處理好的樣品,進(jìn)樣到HPLC中,和標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件,記錄色譜峰。根據(jù)測(cè)出來(lái)的樣品的色譜峰面積,結(jié)合回歸方程,計(jì)算出樣品中的AMP含量。
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