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玉米黃質(zhì),又稱為玉米黃素。它是從玉米皮或玉米粗蛋白種提取出來(lái)的天然色素,具有較高的利用價(jià)值,特別是在食品,化妝品,醫(yī)藥等行業(yè)。玉米黃質(zhì),屬于類胡蘿卜素,是一種天然的脂溶性化合物。化學(xué)式為C40H56O2,分子量為568.87,不溶于水,易溶于乙醚、 石油醚、 丙酮、 酯類等有機(jī)溶劑。具有較好的耐酸、耐堿性,并且不受鐵、鉛等金屬離子的影響。玉米黃素的化學(xué)結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定,人體吸收后依然能夠保持原來(lái)的結(jié)構(gòu)形態(tài)和顏色,它的著色能力較強(qiáng)。玉米黃素具有抗氧化能力,在花卉、 水果、 黃玉米、 枸杞等都含有。
檢測(cè)樣品中的玉米黃素含量,實(shí)驗(yàn)室的方法有高效液相色譜(HPLC)法、薄層層析(TLC)法、分光光度法等。以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下。
1.樣品處理
上面我們已經(jīng)提到,玉米黃素是易溶于乙醚,丙酮等有機(jī)溶劑。因此,在處理的時(shí)候,需要結(jié)合到玉米黃素的物理和化學(xué)性質(zhì),提取出來(lái)以便于上液相色譜檢測(cè)。為了滿足檢測(cè)的要求,一般會(huì)使用甲醇,乙酸乙酯或正己烷等溶劑或混合溶劑,對(duì)樣品進(jìn)行提取。根據(jù)樣品的其他特性,或需要水洗,抽濾,超聲等方法,進(jìn)一步提取,待測(cè)。
2.色譜條件
使用HPLC測(cè)玉米黃素,色譜條件是最為重要的一個(gè)環(huán)節(jié),直接決定了實(shí)驗(yàn)的成敗。色譜柱,使用傳統(tǒng)的C18柱,長(zhǎng)度250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um,柱溫為室溫。柱溫的設(shè)置,并非是一成不變的,根據(jù)實(shí)際的實(shí)驗(yàn)環(huán)境來(lái)調(diào)整。以乙腈-甲醇-二氯甲烷為流動(dòng)相,選擇恰當(dāng)?shù)谋壤榷认疵?。流速?ml/min。紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)450nm,也可以重新掃描確定最佳的檢測(cè)波長(zhǎng),或進(jìn)行必要的驗(yàn)證。進(jìn)樣量10-20ul,可以參考相關(guān)的研究文獻(xiàn),但不能照抄照搬。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
有了檢測(cè)條件,就需要一個(gè)“尺子”去測(cè)量樣品的玉米黃素含量。這個(gè)“尺子”就是標(biāo)準(zhǔn)曲線,它是一種外標(biāo)法。也就是將玉米黃素的標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行一定的溶解,并成倍的、梯度的稀釋5-7個(gè)濃度點(diǎn),記錄下來(lái)。根據(jù)上述的色譜條件,進(jìn)樣到HPLC測(cè)出色譜峰圖,對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分,可以手動(dòng),也能選擇自動(dòng)。在辦公軟件中,可以根據(jù)峰面積,對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。確保的是r2>0.999,需要考慮重復(fù)性和回收率等情況。
4.樣品測(cè)定和計(jì)算
對(duì)樣品的測(cè)定,方法和步驟和標(biāo)準(zhǔn)品相似的。根據(jù)測(cè)出來(lái)的色譜峰面積,代入到回歸方程,就可以計(jì)算出玉米黃素的含量。
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