在植物體內(nèi)，蔗糖是重要的光合作用產(chǎn)物，是碳水化合物的儲(chǔ)存形式之一。目前，蔗糖合成酶和蔗糖磷酸酶是植物體內(nèi)合成蔗糖的重要的酶。通過(guò)測(cè)定這兩種酶的活性，可以判斷出植物組織合成蔗糖的能力。

蔗糖合成酶能夠催化游離果糖和二磷酸尿苷葡糖反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖磷酸合成酶能夠催化二磷酸尿苷葡糖和果糖-6-磷酸結(jié)合形成磷酸蔗糖，6-磷酸蔗糖經(jīng)過(guò)磷酸蔗糖酶的水解形成蔗糖。果糖是酮糖，可以和間苯二酚混合加熱生產(chǎn)紅色的產(chǎn)物，在一點(diǎn)范圍內(nèi)糖的含量和反應(yīng)顏色是成正比的。蔗糖在含有顏色的間苯二酚中水解為葡萄糖和果糖，也能生成紅色產(chǎn)物。因此，可以利用這個(gè)特征采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中的酶活，確定一下檢測(cè)的波長(zhǎng)，測(cè)定吸光度和濃度的關(guān)系，基于標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中的蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量。

所需設(shè)備：冷凍離心機(jī)、恒溫水浴、分光光度計(jì)。

試劑：HEPES-NaOH緩沖液，0.1%間二苯酚，30%鹽酸，2mol/L NaOH，100mmol/L6-磷酸果糖，果糖。

稱取0.5g的植物樣品，洗凈剪碎，放在研缽中，加入HEPES-NaOH的緩沖液，冰浴研磨，離心10min，備用。

在測(cè)定酶活的過(guò)程中，依次加入50uL粗酶液，50uLHEPES-NaOH緩沖液，20uL 50mmol/L MgCl2，20ulUDPG,20uL6-磷酸果糖。在30℃的水浴中反應(yīng)30min，加入200ul的2mol/LNaOH終止反應(yīng)，沸水煮10min，流水冷卻。加入1.5mL30%的顏色和0.5ml0.1%的間苯二酚，搖勻后放在80℃的水浴保溫10min，冷卻后。在分光光度計(jì)的480nm的波長(zhǎng)處，檢測(cè)溶液的吸光度值，以空白作為對(duì)照。

檢測(cè)的過(guò)程中，離不開(kāi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的。比如取0,40,80,120,160,200ug/mL的蔗糖溶液50uL，操作步驟和上面相同，測(cè)定吸光度值。以蔗糖濃度為縱坐標(biāo)，以吸光度值為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。最后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中的蔗糖合成酶活力。