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單寧,又稱鞣酸,或單寧酸。單寧是一種有機化合物,主要來源于葡萄的籽、皮、梗等。單寧是天然的防腐劑、抗氧化劑,被用在食品、藥品、化妝品等行業(yè)。檢測單寧含量,主要的方法有福林酚試劑法、酶解法、高效液相色譜法。
1.福林酚試劑法
這是一種傳統(tǒng)的、經(jīng)典的檢測單寧含量的方法,它可以測定植物果實、蔬菜、茶葉等樣品。檢測的原理也很簡單,就是靠樣品中的單寧和福林酚試劑發(fā)生反應(yīng),生成藍色的化合物。通過比色法測定藍色化合物的吸光度,從而確定單寧的含量。
先將新鮮可口的葡萄樣品粉碎,或在組織搗碎機中勻漿,加入20mL80%的甲醇、3600r/min,離心5min,取上清液。然后,定容至100mL。
以沒食子酸為標準品,取5個梯度濃度的沒食子酸標準溶液,分別加入蒸餾水,鎢酸鈉-鉬酸鈉混合液和碳酸鈉溶液,混勻后的沒食子酸的濃度為1.0 mg/L,2.0 mg/L,3.0 mg/L,4.0 mg/L,5.0 mg/L,顯色,放置 2 h,以標準曲線 0.0 mg/L 為空白。使用紫外可見分光光度計,波長為765nm測定吸光度。以濃度為縱坐標,以吸光度為橫坐標,制作標準曲線。
將提取到的單寧樣品溶液,按同樣的方法顯色,放置2h,以0.0mg/L為空白,在765nm波長下測定樣品溶液吸光度,根據(jù)標準曲線計算出樣品中的單寧含量。
2.高效液相色譜(HPLC)法
HPLC法測定單寧含量,是一種比較高效、準確、靈敏的方法,它常用于測定茶葉啊,葡萄酒啊,草藥等單寧含量。這種方法的基本原理,就是利用色譜柱將樣品中的單寧和其他化合物分離出來,通過測定峰面積的方式,來測定樣品中的單寧含量。
樣品準備是要充分考慮的,它包括將樣品粉碎,加入適量的溶劑,離心提取等詳細的步驟。對樣品的保存是不容忽略的,為了盡可能的準確測量出單寧的含量,操作要求和環(huán)境條件是需要確定的。其次,為了檢測準確,還需要對儀器設(shè)備進行調(diào)試。主要是選擇最佳的檢測條件,有的是現(xiàn)成的方法,有的需要開發(fā)和驗證,從色譜柱、柱溫、流動相、進樣量、流速、檢測器的檢測波長等方面進行設(shè)置。然后,就要使用標準品上機檢測,標準品梯度進樣,是為了分別得到梯度的峰值,制作出來一條能夠覆蓋到樣品濃度的標準曲線。最后,將樣品進樣檢測,根據(jù)得到的峰高/峰面積,結(jié)合標準曲線,計算出樣品中的單寧含量。
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