α-酮戊二酸，化學(xué)式為C5H6O5，分子量為146。它廣泛的存在自然界中，比如菠菜中就有豐富的α-酮戊二酸。α-酮戊二酸是谷氨酸、谷氨酰胺和精氨酸的前體物質(zhì)，通過(guò)細(xì)胞代謝過(guò)程產(chǎn)生。也可以通過(guò)生物合成的方法，具有促進(jìn)能量代謝，增強(qiáng)抗氧化能力，保護(hù)骨骼健康，提高免疫力，保護(hù)神經(jīng)等作用。α-酮戊二酸是三羧酸循環(huán)的中間代謝產(chǎn)物，是谷氨酸、谷氨酰胺和精氨酸的前體物質(zhì)，參與維生素和有機(jī)酸的合成和代謝。

檢測(cè)樣品中α-酮戊二酸的方法，有高效液相色譜（HPLC）法，有比色法，也有酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。比色法和ELISA法是可以通過(guò)試劑盒的形式，按照說(shuō)明書的要求，按部就班完成操作，注意一下試劑和操作的問(wèn)題。這里以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)過(guò)程。

1.α-酮戊二酸的提取過(guò)程

將樣品研磨粉碎，過(guò)篩，準(zhǔn)確稱取1g，放入50ml的容量瓶中，加入45ml的乙酸乙酯，超聲處理30min，靜置過(guò)夜。過(guò)夜后，加入乙酸乙酯定容，過(guò)濾后，吸取25ml濾液蒸干，加入甲酸溶解，定容到10mL，待測(cè)。

2.色譜條件

C18的色譜柱，250mm長(zhǎng)，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑，柱溫30℃；以磷酸二氫鈉溶液（pH3.3-3.5）和水為流動(dòng)相，等度洗脫，流速1ml/min，進(jìn)樣量10-20ul，紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)205nm，僅供參考。在實(shí)際情況下，需要對(duì)條件進(jìn)行驗(yàn)證或重新開發(fā)，充分優(yōu)化色譜條件。這個(gè)過(guò)程，考驗(yàn)的是實(shí)驗(yàn)人員對(duì)機(jī)器設(shè)備性能參數(shù)的熟悉，對(duì)樣品及目標(biāo)化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)的了解。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

首先，就要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相或理想的有機(jī)溶劑進(jìn)行配制。一般情況下，為了更準(zhǔn)確起見(jiàn)，采用外標(biāo)法。也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線，梯度稀釋6個(gè)點(diǎn)，在檢測(cè)器的有效檢測(cè)范圍內(nèi)。進(jìn)樣到HPLC，測(cè)出來(lái)色譜峰，對(duì)面積進(jìn)行積分。對(duì)應(yīng)6個(gè)不同的濃度，在表格中用函數(shù)來(lái)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，r2需要大于0.999。有的時(shí)候，還需要驗(yàn)證回收率，重復(fù)性，精密度等。樣品中的α-酮戊二酸含量，就是根據(jù)樣品的色譜峰面積，和回歸方程，計(jì)算出來(lái)的。