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二磷酸尿苷葡萄糖,是一種糖核苷酸,可以縮寫為UDPG。它在人體內(nèi),是由尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶催化而成的。這種化合物廣泛的分布在植物、動(dòng)物和微生物中,為蔗糖,淀粉等多糖提供葡萄糖基。在單糖的互變,生成糠醛酸的時(shí)候,可以作為重要的中間產(chǎn)物。
實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法,包括有高效液相色譜(HPLC)和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)。
1.HPLC
要想分離出樣品中的化合物UDPG,就要先通過(guò)物理和化學(xué)的方法,將樣品粉碎,過(guò)篩,溶入有機(jī)溶劑,超聲,離心,過(guò)濾等。盡可能的提取出來(lái),以供檢測(cè)。這個(gè)時(shí)候,就要考驗(yàn)基本功底了。同時(shí),能不能測(cè)出來(lái),也是看預(yù)處理的提取過(guò)程是否合理。比如,在5℃的條件下,高速離心10min,取上清液用0.45um膜過(guò)濾。
色譜條件:通過(guò)合適的色譜柱和流動(dòng)相,將樣品中的UDPG分離并洗脫出來(lái),通過(guò)DAD檢測(cè)器可檢測(cè)低濃度目標(biāo)物。具體參數(shù),需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行開(kāi)發(fā)或驗(yàn)證,以獲得較有效的色譜峰,便于后續(xù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量計(jì)算。
2.ELISA
基于雙抗體夾心法:將純化的UDPG捕獲抗體包被于微孔板,加入待測(cè)樣本后形成抗原-抗體復(fù)合物,再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合。通過(guò)底物TMB顯色,顏色深淺與UDPG濃度成正比。
按說(shuō)明書的操作步驟進(jìn)行,顯色反應(yīng)完成后,用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中UDPG的具體含量。
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