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黃芩素,主要是存在于黃芩中而得名。它是黃芩的有效成分,是一種黃酮類化合物?;瘜W(xué)式為C15H10O5,分子量為270.24,它是有3個(gè)環(huán)組成的,兩個(gè)苯環(huán)(A環(huán)和B環(huán))和一個(gè)含氧雜環(huán)(C環(huán))。在280-340 nm有強(qiáng)吸收。溶于甲醇,乙醇,丙酮,醋酸乙酯和熱冰醋酸,微溶于水。分子中含有多個(gè)羥基,具有抗菌,消炎,抗氧化,改善血液循環(huán),清除體內(nèi)熱毒等作用。
檢測樣品中的黃芩素含量,實(shí)驗(yàn)室的方法有分光光度法,高效液相色譜(HPLC)法,液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法,薄層色譜(TLC)法等。這里以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測過程,僅供參考。
1.樣品處理
如果是植物樣本,就可以打碎成粉末。精密稱取5mg,倒入25ml的容量瓶中,加入適量的甲醇,進(jìn)行超聲溶解。冷卻到室溫的時(shí)候,用甲醇進(jìn)行稀釋定容到刻度,搖勻。用0.45um的濾膜過濾,待測。
2.色譜條件
C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,粒徑5um,柱溫30-35℃;以甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相(梯度洗脫)或甲醇/乙腈-水,流速1.0ml/min;紫外檢測器,波長280nm;進(jìn)樣量10-20ul。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
在處理樣品的時(shí)候,也需要處理一下標(biāo)準(zhǔn)品。比如,稱量2mg的黃芩素,在10mg的容量瓶中,用甲醇超聲溶解,冷卻到室溫,定容即可。標(biāo)準(zhǔn)曲線,是由坐標(biāo)軸上的5-7個(gè)點(diǎn)連接在一起形成的一條近似直線。那么,稀釋的第一個(gè)點(diǎn)比較重要,也是標(biāo)曲的最低點(diǎn)。一般是選擇信噪比的5-10倍,獲得相對優(yōu)良的線性。依次,成倍的梯度稀釋。通過以上的色譜條件,測出對應(yīng)的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分,對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,繪制標(biāo)曲,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2要大于0.999。
4.樣品測定
當(dāng)有了標(biāo)準(zhǔn)曲線,就可以通過樣品的色譜峰面積,計(jì)算出樣品中的黃芩素含量。樣品測定的條件,要和標(biāo)準(zhǔn)品一樣的,避免造成誤差。同時(shí),有的需要考慮回收率,重復(fù)性等。從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí),可靠。
質(zhì)譜法通過質(zhì)譜檢測黃芩素的分子離子峰,內(nèi)標(biāo)或標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法,計(jì)算出樣品中的黃芩素含量。
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