金屬硫蛋白，就是存在動植物或微生物體內(nèi)的金屬結(jié)合蛋白。具有較強(qiáng)的金屬結(jié)合能力，對重金屬有高度的親和性。它的分子量比較低，可以與隔，銅和鋅等金屬結(jié)合。金屬硫蛋白有4種異構(gòu)體，含有半胱氨酸和金屬結(jié)合蛋白，它的巰基能夠強(qiáng)烈的螯合有毒金屬，并將它排除體外，實現(xiàn)解毒功能。金屬硫蛋白還具有清除自由基的能力，具有美白潤膚的作用。

檢測植物中的金屬硫蛋白含量的方法有多種，這里簡單的介紹3種，如LC-MS，比色法，ELISA法。

1.LC-MS

樣品制備：將0.002g的樣品，放在1.5ml的離心管中，用1ml的碳酸氫銨溶解，混勻。吸取125ul到另外一個離心管中，再加入825ul的碳酸氫銨溶液，就剛剛好夠1ml了，混勻后進(jìn)行酶解。

酶解反應(yīng)：將上述的溶液，吸取40ul出來，放到1.5ml的離心管中。加入60uL的碳酸氫銨溶液，4ul的DTT溶液，混合后37℃水浴1h，冷卻至室溫。加入20ul的IAA溶液，避光靜置30min，對半胱氨酸進(jìn)行烷基化修飾。14000r/min，4℃離心30min，加入100ul的碳酸氫銨，再離心一次。之后，加入100ul的碳酸氫銨溶液，加入10ul的胰蛋白酶溶液，混勻37℃12h-16h。將酶解反應(yīng)后的溶液，4℃，14000r/min離心，再加50ul的碳酸氫銨溶液。

色譜條件：C18的色譜柱（2.1mmx50mm，1.7um）柱溫30℃，樣品室溫度4℃。以0.1%甲酸溶液和乙腈為流動相，梯度洗脫，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量4ul。

質(zhì)譜條件：電噴霧電離正離子掃描模式，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），噴霧電壓5500V，霧化氣和輔助氣壓力0.379MPa，氣簾氣壓力0.276MPa，離子源溫度550℃，裂解電壓70V，碰撞能量30eV。金屬硫蛋白特征肽段，母離子（m/z）498.7。

可以參考GB/T38086-2019中的操作步驟。

2.DTNB比色法

DTNB（5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)）與巰基反應(yīng)生成黃色的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物在特定波長（如412 nm）下具有特征吸收峰。通過測定反應(yīng)體系在特定波長下的吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計算出巰基化合物的含量。

3.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法

在預(yù)先包被金屬硫蛋白（MT）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。使用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的金屬硫蛋白含量呈正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品濃度。