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阿魏酸是肉桂酸的衍生物之一,化學(xué)名稱是3-甲氧基-4-羥基肉桂酸。在阿魏、當(dāng)歸、川芎、升麻、酸棗仁等中藥材中含量還是比較高的,食物中的谷殼、咖啡、米糠等也有,具有抗氧化的作用,可以從植物中直接提取。在植物中,阿魏酸很少以游離態(tài)的形式存在,主要是低聚糖、多胺、脂類和多糖的結(jié)合態(tài)。
檢測(cè)植物樣品中阿魏酸的含量,主要的方法包括高效液相色譜(HPLC)法、薄層掃描法、薄層分光光度計(jì)法、高效毛細(xì)管電泳法等,這里就HPLC簡(jiǎn)單的介紹一下原理和基本過程。
HPLC檢測(cè)原理:將樣品溶解、提取、過濾處理,濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)323nm處檢測(cè)阿魏酸的吸收值。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品檢測(cè)峰值,計(jì)算出阿魏酸的含量。
樣品的制備,對(duì)于植物的樣品是要進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚聿拍苌蠙C(jī)檢測(cè)的。將樣品粉碎,過40目篩,精密稱量0.5g,加入甲醇30mL,加熱回流提取1h,過濾,殘留物再分別用10mL的甲醇洗滌2次,合并提取液,蒸干,用甲醇定容10mL容量瓶。這個(gè)過程看起來是繁瑣的,可每一個(gè)步驟都是非常重要的。要想獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),就要求每個(gè)步驟的量都是準(zhǔn)確的、到位的,沒有雜質(zhì)污染的。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,做HPLC檢測(cè)的人都很清楚,這是必須要做的。標(biāo)曲就要用到標(biāo)準(zhǔn)品,按說明書或國標(biāo)的要求進(jìn)行測(cè)定。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液2、8、12、16、20μL注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)323nm處測(cè)定阿魏酸的吸收值,以進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程。
我們的最終目標(biāo)是為了檢測(cè)樣品中的阿魏酸含量,精密吸取10uL的樣品溶液,注入到HPLC中,采用紫外檢測(cè)器,在323nm的地方測(cè)定峰值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中的阿魏酸含量。
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