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多胺是一類含有兩個或多個氨基的化合物,比如腐胺、精胺、亞精胺等,能夠阻止植物組織的衰敗,有助于繼續(xù)生長。多胺主要是由鳥氨酸、精氨酸在鳥氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶的作用下合成的。它能夠促使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)或磷脂結(jié)合,使得細(xì)胞膜更穩(wěn)定,而不容易衰敗破裂。檢測植物中的多胺含量,通常情況下用的是高效液相色譜(HPLC)法。
HPLC檢測植物多胺含量,需要準(zhǔn)備儀器和試劑,確定色譜檢測條件,對樣品進(jìn)行處理,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中多胺的含量。
檢測多胺含量用的是C18的色譜柱,紫外檢測器,以甲醇:水=60:40為流動相,甲醇為色譜純,水為超純水。對于檢測波長、流速、柱溫等條件,可以通過設(shè)計(jì)參考的方法,選擇最優(yōu)的、與之匹配的檢測條件。比如檢測波長230nm,柱溫30℃等。我們要做標(biāo)準(zhǔn)曲線的,因此標(biāo)準(zhǔn)品肯定是不能缺少的,腐胺,精胺,亞精胺。
對于植物樣品的處理,已經(jīng)有方法的就按成熟的方法操作。每個操作步驟都是合理的,準(zhǔn)確的,科學(xué)的。比如在冰浴中研磨,用高氯酸浸提離心。再加苯甲酰氯、NaOH、37℃水浴。接著加飽和NaCl和乙醚萃取,離心后真空干燥,最后用甲醇溶解過濾。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,是整個檢測過程中不可缺少的。它是將3種多胺的標(biāo)準(zhǔn)品,都按上面的方法進(jìn)行苯甲?;渲瞥?個梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣測定其峰高和峰面積。以峰面積和進(jìn)樣量相對照,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。對樣品進(jìn)行同樣條件下檢測,記錄測定的峰高和峰面積,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的多胺含量。
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