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氨基糖含量測(cè)定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-05-28 | 195 次瀏覽 | 分享到:

氨基糖是一種將糖結(jié)構(gòu)上的羥基取代為氨基而形成的一種有機(jī)化合物,這個(gè)取代的過程需要有專屬的合成酶完成。氨基糖它是細(xì)胞壁肽聚糖或幾丁質(zhì)的關(guān)鍵組成部分,同時(shí)也為蛋白質(zhì)修飾提供了原料。在細(xì)胞的代謝過程中,必須要攝取細(xì)胞外的氨基糖。氨基糖為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),為蛋白質(zhì)提供修飾原料,為細(xì)胞提供骨架支撐,是蛋白質(zhì)N-糖基化、O-糖基化及GPI糖脂合成過程中不可缺少的一個(gè)部分。土壤中的氨基糖,標(biāo)志著微生物的殘留情況。因?yàn)榘被鞘羌?xì)胞壁肽聚糖和幾丁質(zhì)的基本組成單位,廣泛存在于土壤真菌、細(xì)菌以及土壤低等動(dòng)物中。而土壤氨基糖并不是單一的,它包括了葡糖胺、胞壁酸、半乳糖胺和甘露糖胺。



檢測(cè)土壤中氨基糖含量的方法有:高效液相色譜(HPLC)法、酶解法、比色法等。


1. 高效液相色譜法(HPLC)


測(cè)定土壤中氨基糖的含量,HPLC是常用的一種方法。利用色譜儀將土壤樣品中的氨基糖分離出來,并通過檢測(cè)器獲取峰值信號(hào)。在檢測(cè)之初,要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理才能上機(jī)檢測(cè)。而要檢測(cè)出準(zhǔn)確的含量,就要通過梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品,在HPLC上讀取數(shù)據(jù)和圖譜,以此來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。以檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的條件為條件,同樣方式來檢測(cè)樣品,通過讀取的數(shù)據(jù)結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中所包含的氨基糖的含量。這種方法分離效果好、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。但需要對(duì)設(shè)備足夠熟悉,了解檢測(cè)方法和過程,并能科學(xué)判斷獲得的數(shù)據(jù)。也有用到氣相或氣質(zhì)聯(lián)用的方法,檢測(cè)土壤中氨基糖的含量。



2. 酶解法


酶解法就是通過酶解劑,將土壤中的氨基糖轉(zhuǎn)化為可測(cè)定的產(chǎn)物。酶解可以在常溫下進(jìn)行,也可以在特定的溫度條件下完成,當(dāng)酶解完成的時(shí)候就要有特定的標(biāo)記物來確定終點(diǎn)。通過酶解的程度來判斷樣品中含有氨基糖的量。常用的酶解劑有酶解酶和葡萄糖氧化酶,反應(yīng)的過程中要注意酶解的條件,避免不穩(wěn)定因素對(duì)酶解效果有影響??梢酝ㄟ^特定的標(biāo)記物,來確定酶反應(yīng)的情況,最后用熒光或比色的方法來確定氨基糖的含量。此外,還可以用酸水解的方法,通過鹽酸或硫酸對(duì)樣品進(jìn)行水解,用適當(dāng)?shù)闹甘緞┻M(jìn)行滴定,可以計(jì)算出樣品中氨基糖的含量。


3. 比色法


比色法就是通過氨基糖和特定試劑反應(yīng),發(fā)生顏色的變化。顏色的變化,通過標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定,用分光光度計(jì)測(cè)定顏色的吸光度值,從而對(duì)應(yīng)已知的濃度值。檢測(cè)土壤氨基糖含量,主要有這么幾個(gè)步驟。準(zhǔn)備土壤樣品,將土壤樣品干燥餅過篩,去除掉雜質(zhì)或大的顆粒。然后,加入適量的緩沖液,混勻離心,得到上清液。更為重要的是,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,這里就不用詳細(xì)說了。測(cè)定土壤樣品,要進(jìn)行顯色反應(yīng),要滿足反應(yīng)的條件,并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成,在540nm的波長(zhǎng)處讀取數(shù)據(jù),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算出樣品中的氨基糖含量。


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