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花色苷是花色素和糖以糖苷鍵的方式結(jié)合而成的一種化合物,它存在于植物的花、莖、葉、果實和根部的細胞液中。有了花色苷的存在,能夠讓植物呈現(xiàn)不同的顏色,比如紅色、紫色、紫紅色或蘭色等?;ㄉ帐且环N類黃酮,能夠清除自由基,保護視力,已被應(yīng)用于食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥等行業(yè)?;ㄇ嗨匾彩且环N花色苷,只是它不含有糖基,它是一種水溶性的色素,可以隨著細胞酸堿度而發(fā)生顏色的變化。
檢測植物組織中的花色苷含量,一般可以用到pH示差法、高效液相色譜(HPLC)法和質(zhì)譜(MS)法。
1.pH示差法
用這種方法檢測花色苷含量,就先準備緩沖液,第一、pH1.0的緩沖液,1.86g的氯化鉀,加980mL的蒸餾水,用鹽酸調(diào)節(jié)pH到1.0,定容1000mL。第二、pH4.5緩沖液,用32.81g的無水醋酸鈉,加980mL的蒸餾水,用鹽酸調(diào)pH值到4.5,定容至1000mL。
下面就要進行檢測了,用pH1.0,pH4.5的緩沖液,將樣品中的花色苷稀釋一定的倍數(shù),平衡15min。然后,分別讓這2個不同的pH的溶液,在可見分光光度計的510nm和700nm的波長處,測定吸光度,以蒸餾水為空白對照。測定的吸光度A=(A510-A700)pH1.0-(A510-A700)pH4.5,花色苷的濃度就是檢測的吸光度Ax稀釋倍數(shù)x矢車菊-3-葡萄糖苷的分子量x消光系數(shù)。
2.液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)法
樣品處理:將待測的花色苷樣品進行處理,粉碎成粉末后,加入適量的甲醇或乙醇進行提取,在離心機上分離,并收集上清液備用。
LC-MS檢測:將上清液進樣到HPLC進行分離,以梯度洗脫的方法。通過分離后的花色苷,在質(zhì)譜檢測器中,獲得分子量和結(jié)構(gòu),可以更準確、更靈敏的檢測出花色苷的含量。這種方法,需要昂貴的檢測設(shè)備和成熟的技術(shù)人員,才能有效的完成檢測。
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